Caracterización estructural, mediante Resonancia Magnética Nuclear, de CmPIII, un inhibidor “no clásico” de la familia Kazal

Caracterización estructural, mediante Resonancia Magnética Nuclear, de CmPIII, un inhibidor “no clásico” de la familia Kazal

Ciencias biológicas

Ciencias Sociales

secuencia con los inhibidores de la familia Kazal. Estos inhibidores están constituidos por uno o varios dominios, de 40-60 residuos de aminoácidos y tres puentes disulfuro (Cys I-Cys V, Cys II-Cys IV y Cys III-Cys VI) que determinan una conformación típica. La relación entre el número de residuos entre las Cys I y II (m), y entre las Cys IV y V (n) ha determinado la clasificación de los inhibidores Kazal en “clásicos” y “no clásicos” (grupo 1 y grupo 2). Estas diferencias en la secuencia de aminoácidos conducen a distintas disposiciones espaciales del segmento amino terminal y del puente disulfuro I-V en los diferentes tipos de inhibidores. CmPI-II se clasificó como un inhibidor Kazal “no clásico”, sin embargo, presenta una relación m/n que no coincide con los grupos 1 y 2, por lo que se ha planteado que esta proteína podría definir un nuevo grupo (grupo 3) dentro de esta familia. Para confirmar que estas diferencias en la secuencia de CmPI-II implican cambios importantes en su estructura tridimensional (3D), en este trabajo se abordó la caracterización estructural (estructura 3D y estudios de dinámica) mediante Resonancia Magnética Nuclear. Para ello, en primer lugar, se realizó su obtención recombinante en el sistema de Pichia pastoris, así como su purificación y caracterización molecular y cinética. CmPI-IIr, mostró características funcionales y moleculares similares al inhibidor natural por lo que puede ser utilizado en los estudios estructurales. Adicionalmente se expresaron y purificaron las variantes marcadas 15N CmPI-IIr y 15N/13C CmPI-IIr. La estructura 3D de CmPI-II mostró las características típicas de la familia Kazal: una hélice a y una hoja ß de tres hebras antiparalelas que conforman el núcleo central y un 60% de estructura al azar, donde el segmento amino terminal y la región cercana al lazo de unión a la enzima son las zonas más flexibles de la molécula. La comparación de la estructura obtenida con las depositadas en el PDB demostró que CmPI-II...

Cabrera Muñoz, Aymara

Rivero Antigua, Maday Alonso del (Director)

Editorial Universitaria

2016

Cuba, Ministerio de Educación Superior

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Español

Texto

isbn:9789591634740

La Habana